Untersuchung zytotoxischer Mechanismen in humanen NK Zellen

Nat rliche Killerzellen (NK) sind ein Teil des angeborenen Immunsystems. Sie bilden eine immunologische Synapse (IS) mit infizierten oder tumorgenen Zielzellen und t ten diese durch Todesrezeptoren (Fas Ligand CD95 und Fas Rezeptor CD178) oder durch die Freisetzung von Perforin und Granzym in lytischen Granulen. Fas-FasL Bindung induziert Apoptose. Perforinfreisetzung kann entweder eine direkte Lyse der Zielzellen (Nekrose) ausl sen, oder zum Eindringen von Granzymen in die Zielzelle f hren, was eine Apoptose induziert. Beide NK-abh ngigen Zielzelltode wurden in der Literatur beschrieben, jedoch wurden die populationsweiten Analysen lediglich durch Endpunktassays realisiert. Die dynamische Regulation der NK-abh ngigen Apoptose und Nekrose von Zielzellen auf Einzelzellebene wurde noch nicht untersucht. Um dynamische Einzelzellprozesse zu studieren wurden Zielzellen, die durch menschliche NK Zellen umgebracht werden k nnen, mit einem Zelltodsensor stabil transfiziert. Dieser Assay erlaubt die Klassifikation von Einzelzellapoptosen und -nekrosen durch unterschiedliche Fluoreszenzmuster des FRET-basierten Sensors.