Transkriptomanalyse Von Rekombinanten Cho-Zellen

Die Methoden der Transkriptomanalyse stellen eine Moglichkeit dar, globale Untersuchungen auf Transkriptlevel durchzufuhren. Die Verwendung dieser Methoden findet auch in der Zellkultur statt, um einen "Blick in die Zelle" zu werfen und somit Ruckschlusse auf die Biopharmazeutika-Produktion schliessen zu konnen. Im Vordergrund dieser Arbeit steht die Etablierung einer Methode zur Transkriptomanalyse fur Chinese Hamster Ovary (CHO) Zellen. Ziel war die Erstellung eines CHO-spezifischen Microarrays, der die Bezeichnung CHO41K erhielt, und seine Anwendung in relevanten Fragestellungen. Die Basis des CHO41K Microarrays wurde aus einem breiten Spektrum von CHO-Sequenzen gebildet. Der Microarray besteht aus 41 304 Probes und deckt damit nahezu das gesamte Transkriptom von CHO-Zellen ab. Die mit dem Microarray erbrachten Resultate wurden mittels quantitativer real-time reverse Transkription PCR verifiziert. Es zeigte sich, dass der Microarray nachvollziehbare und solide Ergebnisse produziert. Zu den Anwendungen gehort die Analyse des metabolischen Shifts von der Laktatbildung zum -verbrauch, der Vergleich zweier Kultivierungssysteme mit unterschiedlichen Homogenisierungstechniken und eine Untersuchung, ob identisch gefuhrte Kulturen dennoch transkriptionelle Unterschiede aufweisen. Die durchgefuhrten Anwendungen zeigen, dass mithilfe des CHO41K Microarrays eine Untersuchung des Transkriptoms bzgl. verschiedenster Fragestellungen moglich ist. Durch die Anwendung des Microarrays konnen Vermutungen aus der Literatur gestutzt bzw. erganzt und tiefere Einblicke ermoglicht werden.