Purificazione della superossido dismutasi da un isolato batterico

Le cellule sono state raccolte dall'isolato di coltura batterica mediante centrifugazione e sono state sospese in un tampone Tris-HCl a pH 8.0. La densità ottica (D.O.) delle cellule è stata misurata a 600nm e ogni volta le cellule di 21,5 densità ottiche (D.O.) sono state disgregate e utilizzate per la purificazione dell'enzima.Purificazione della superossido dismutasi da SPB-13.Ilmetodo di precipitazione del solfato di ammonio è stato utilizzato per concentrare le proteine.Dopo questo, l'enzima è stato ulteriormente purificato mediante colonna DEAE-Sepharose. La colonna DEAE-sefarosio è stata caricata con 3ml di proteine concentrate.L'attività enzimatica è stata registrata solo nelle frazioni 22, 23, 24, 25, 26, 27 e 28. Queste frazioni sono state sondate insieme. Le frazioni sondate insieme all'enzima grezzo sono state controllate per la purezza mediante SDS-PAGE.L'attività massima della superossido dismutasi di SPB-13 è stata trovata nel tampone Tris-HCl, 60mM molarità, pH 8.0, il tempo di incubazione è risultato essere 2.0 minuti, temperatura di incubazione 450C. Una concentrazione dell'enzima di 10 µg è risultata ottimale. La termostabilità della superossido dismutasi è stata controllata e l'enzima è risultato termostabile fino a550Cper 60 minuti.